Formalin Fixed and Paraffin Embedded
FFPE樣本作為生物和醫學領域的重要樣本來源,廣受研究者的青睞。由于樣本固定和儲存過程中,容易發生核酸的降解和損傷,因此獲得符合測序質量要求的文庫通常很具有挑戰性。那么面對做DNA-Seq的FFPE樣本,應該如何應對呢?
“想要隨心所欲的進行FFPE-DNA樣本文庫構建”,
這個神器值得擁有
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【SMARTer ThruPLEX DNA-Seq Kit】
“飛一般感覺”的操作
FFPE樣本珍貴,擔心在文庫制備時損失?選擇它吧。
該試劑盒利用ThruPLEX技術,通過使用特殊的莖環形接頭,實現了更加簡潔高效的實驗流程和更短時間的手動操作。從起始DNA樣本到可用于上機測序的文庫僅需要三步2小時的操作。特別需要說明的是,整個操作是在一個反應管中即可完成,中間不需要純化,能很大程度的減少樣本的污染和損失!
技術概要:
(圖片來源于Takara Bio Inc.)
“*”的文庫質量
FFPE樣本降解嚴重,害怕不能得到高質量文庫?選擇它吧。
Takara嚴謹的數據評測:使用100 ng的FFPE-DNA樣品,分別使用本試劑盒、A公司試劑盒和B公司試劑盒制備文庫,然后使用Illumina NextSeq 500(2×76bp)測序分析。相比于其他公司試劑盒,以FFPE樣品起始時,使用本試劑盒可以獲得多樣性更好的文庫。另外,使用本試劑盒制備的文庫,在不同GC含量范圍內可以產生更均勻的覆蓋分布。
(數據來源于Takara Bio Inc.)
“經得起檢驗”-文獻引用加持
說得好不如做得好,應用文獻的真實反饋可供參考,選擇它吧。
2018年7月20日發表在《npj Genomic Medicine》題為Recurrent loss of heterozygosity correlates with clinical outcome in pancreatic neuroendocrine cancer的文章。本研究利用全基因組測序技術(WGS)分析了胰腺神經內分泌瘤的拷貝數變異情況,結果表明,胰腺神經內分泌腫瘤的染色體雜合性的缺失與臨床預后相關。實驗以3-50 ng的微量FFPE-DNA樣本起始,使用ThruPLEX-FD Kit(現為ThruPLEX DNA-Seq Kit)制備文庫,并通過WGS與微陣列結果來驗證拷貝數變異(CNV)。
以上內容都佐證了以降解樣本起始時,使用該試劑盒可以得到高品質的文庫!
所以,恰好您要用FFPE樣本進行基因組分析,恰好我有SMARTer ThruPLEX DNA-Seq Kit。世間好物雖多,但它值得嘗試!
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